Референс - центр->

Правила доставки материала в Референс – центр

Одной из задач Референс-центра является углубленное изучение выделенных изолятов (штаммов) вируса КЭ с использованием современных методов молекулярно-генетического анализа.

Референс-центр проводит исследования следующего материала, поступающего из лабораторий ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации, а также из закрепленных для данной территории на базе противочумных учреждений Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности лабораторий:

  1. Клинический материал от больных клещевым вирусным энцефалитом (КВЭ) с тяжелым и атипичным течением, а также секционный материал от умерших с подозрением на КВЭ.
  2. Штаммы (изоляты РНК) вируса КЭ, выделенные из различных источников (люди, мелкие млекопитающие, иксодовые клещи).

Забор, упаковку, передачу и транспортирование материала от пациентов с тяжелыми киническими проявлениями (или умерших) с подозрением на инфекцию, вызванную вирусом КЭ, положительных проб полевого материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», санитарных правил СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, предачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности», а также СП 3.1.3.2352-08 «Профилактика клещевого вирусного энцефалита» (с изменениями и дополнениями на 20.12.2013 г.).

Материалом для вирусологического, серологического и молекулярно-генетического исследования являются кровь и ее фракции (плазма, лейкоцитарная фракция, сыворотка), спинномозговая жидкость, мозг погибших людей, иксодовые клещи.

Забор материала от больных проводится медицинскими работниками стационара, в который госпитализирован больной, прошедшими подготовку по биологической безопасности и правилам работы с клиническим материалом, подозрительным на заражение возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности. Секционный материал отбирают медицинские работники патологоанатомических отделений (бюро судебно-медицинской экспертизы). Транспортировка материала проводится с соблюдением «холодовой цепи».

Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материла для углубленного изучения вируса КЭ приведены в приложениях 1и 2.

 

Приложение 1

Способы взятия материала

  1. Кровь и ее фракции.

    1.1. Цельная кровь. Взятие цельной периферической крови проводят утром натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовым шприцем в объеме 5 мл в пробирку с 6 % ЭДТА из расчета 1:20. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз для перемешивания крови и антикоагулянта.

    Гепарин и цитрат натрия в качестве антикоагулянта не использовать!

    Метод исследования: ОТ-ПЦР.

    1.2. Плазма крови. Отбор цельной периферической крови проводят утром натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовым шприцем в объеме 5 мл в пробирку с 6 % ЭДТА из расчета 1:20. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз. Для отбора плазмы пробирку с кровью центрифугируют 10 минут при 3000g. Затем отбирают плазму крови.

    Метод исследования: ОТ-ПЦР.

    1.3. Лейкоцитарная фракция. В пробирку типа «Эппендорф» вносят 1,5 мл цельной крови, взятой с ЭДТА и центрифугируют при 800g в течение 10 мин, затем верхний слой плазмы в объеме 600-700 мкл снимают во вторую пробирку типа «Эппендорф» и центрифугируют при 11 000g в течение 10 мин. В работу берут осадок клеток и 100 мкл надосадочной жидкости.

    Метод исследования: ОТ-ПЦР.

    1.4. Сыворотка крови. Для получения сыворотки забор крови проводят утром натощак из локтевой вены одноразовым шприцем в объеме 5 мл в пробирку для серологических исследований без антикоагулянта.

    Метод исследования: ИФА, ОТ-ПЦР.

    1.5. Спинномозговая жидкость. Отбирают в случаях проведения пункции с лечебной или диагностической целью в количестве 2-3 мл, но не менее 1 мл, используя одноразовые иглы, в одноразовые пластиковые пробирки.

    Метод исследования: ОТ-ПЦР, ИФА, вирусологический.

    1.6. Секционный материал. Стерильно отбирают кусочки объемом 2-3 см3 из продолговатого мозга, ствола мозга, базальные ядра (подкорковые ядра), верхне-шейный и грудной отделы спинного мозга. Материал помещают в стерильные флаконы с притертыми (закручивающимися) крышками и транспортируют в условиях «холодовой цепи».

    Метод исследования: ОТ-ПЦР, ИФА, вирусологический.

    Вскрытие и отбор проб необходимо проводить в течение первых суток после смерти!

Приложение 2

Условия хранения, транспортировки и предварительной обработки материала

Образцы цельной крови:
- при температуре 20-25 °С – в течение 2 часов;
- при температуре 2-8 °С – в течение 12 часов с момента взятия для качественного определения нуклеиновых кислот;
Недопустимо замораживание образцов цельной крови!

Образцы плазмы и сыворотки крови:
- при температуре 2-8 °С – в течение 5 суток;
- при температуре минус 20 °С – в течение года;
- при температуре минус 70 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала, поэтому образцы плазмы или сыворотки для длительно хранения желательно разлить небольшими аликвотами (0,1 – 0,2 мл) в пробирки объемом 1,5 – 2,0 мл.

Спинномозговая жидкость:
- при температуре 2-8 °С – в течение суток;
- при температуре минус 20 °С – в течение недели;
- при температуре минус 70 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.

Секционный материал:
- при температуре 2-8 °С – в течение 3 суток;
- при температуре минус 20 °С – в течение недели;
- при температуре минус 70 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.

Упаковка и транспортировка материала для углубленного изучения, а также хранение осуществляются в соответствии СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, предачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности». Соблюдая условия тройной упаковки и герметичности контейнер с материалом помещают в сумку-холодильник или во внешний термоконтейнер с хладагентами. Транспортировка (доставка) осуществляется спецсвязью (курьерской службой) или нарочным в условиях «холодовой цепи»: при температуре 0-4 °С – не более 3-х суток; при температуре минус 70 °С или жидком азоте – длительно.

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока
Вебдизайн © Lusya.com