Референс - центр->
Правила доставки материала в Референс – центр
Одной из задач Референс-центра является углубленное изучение выделенных изолятов (штаммов) вируса КЭ с использованием современных методов молекулярно-генетического анализа.
Референс-центр проводит исследования проб, поступающих из лабораторий «ФБУЗ Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации, а также Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности лабораторий.
Пробы, подлежащие исследованию:
- Клинический материал от больных клещевым вирусным энцефалитом с тяжелым и атипичным течением (кровь и ее фракции, спиномозговая жидкость).
- Секционный материал от умерших с диагнозом или подозрением на КВЭ (пробы ствола мозга, продолговатый мозг, базальные ядра, верхний шейный отдел и грудной отдел спинного мозга).
- Полевой материал (мелкие млекопитающие, иксодовые клещи и др.).
- Штаммы/изоляты РНК вируса КЭ, выделенные из различных источников (люди, мелкие млекопитающие, иксодовые клещи).
Важно! Перед отправкой проб на исследование, согласовать с Референс-центром вид материала, количество проб, условия хранения и транспортировки, маркировки и упаковки образцов, а также необходимый пакет сопроводительной документации.
Забор, упаковку, передачу и транспортирование материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями санитарных правил и норм СанПин 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней» (глава IV).
Забор материала от больных проводится медицинскими работниками стационара, в который госпитализирован больной, прошедшими подготовку по биологической безопасности и правилам работы с клиническим материалом, подозрительным на заражение возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности. Секционный материал отбирают медицинские работники патологоанатомических отделений (бюро судебно-медицинской экспертизы). Транспортировка материала проводится с соблюдением «холодовой цепи».
Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материла для углубленного изучения вируса КЭ приведены в приложениях 1и 2.
Приложение 1
Способы взятия материала
- Кровь и ее фракции.
1.1. Цельная кровь. Взятие цельной периферической крови проводят утром натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовым шприцем в объеме 5 мл в пробирку с 6 % ЭДТА из расчета 1:20. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз для перемешивания крови и антикоагулянта.
Гепарин и цитрат натрия в качестве антикоагулянта не использовать!
Метод исследования: ОТ-ПЦР.
1.2. Плазма крови. Отбор цельной периферической крови проводят утром натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовым шприцем в объеме 5 мл в пробирку с 6 % ЭДТА из расчета 1:20. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз. Для отбора плазмы пробирку с кровью центрифугируют 10 минут при 3000g. Затем отбирают плазму крови.
Метод исследования: ОТ-ПЦР, вирусологический.
1.3. Лейкоцитарная фракция. В пробирку типа «Эппендорф» вносят 1,5 мл цельной крови, взятой с ЭДТА и центрифугируют при 800g в течение 10 мин, затем верхний слой плазмы в объеме 600-700 мкл снимают во вторую пробирку типа «Эппендорф» и центрифугируют при 11 000g в течение 10 мин. В работу берут осадок клеток и 100 мкл надосадочной жидкости.
Метод исследования: ОТ-ПЦР.
1.4. Сыворотка крови. Для получения сыворотки забор крови проводят утром натощак из локтевой вены одноразовым шприцем в объеме 5 мл в пробирку для серологических исследований без антикоагулянта.
Метод исследования: ИФА, ОТ-ПЦР.
1.5. Спинномозговая жидкость. Отбирают в случаях проведения пункции с лечебной или диагностической целью в количестве 2-3 мл, но не менее 1 мл, используя одноразовые иглы, в одноразовые пластиковые пробирки.
Метод исследования: ОТ-ПЦР, ИФА, вирусологический.
1.6. Секционный материал. Стерильно отбирают кусочки (фрагменты) мозга объемом 1-2 см3 из продолговатого мозга, ствола мозга, базальных ядер (подкорковых ядер), верхнего шейного и грудного отделов спинного мозга.
Материал помещают в стерильные флаконы (объемом 2,0 – 5,0 мл) с закручивающимися крышками. Верхний конец флакона герметизируют парафильмом или лейкопластырем (не скотчем!!!!), маркируют (указывая дату отбора пробы, наименование пробы и ФИО).
Метод исследования: ОТ-ПЦР, ИФА, вирусологический.
Вскрытие и отбор проб необходимо проводить в течение первых суток после смерти!!!
Приложение 2
Условия хранения, транспортировки и предварительной обработки материала
Образцы цельной крови:
- при температуре 20-25 °С – в течение 2 часов;
- при температуре 2-8 °С – в течение 12 часов с момента взятия для качественного определения нуклеиновых кислот;
Недопустимо замораживание образцов цельной крови!
Образцы плазмы и сыворотки крови:
- при температуре 2-8 °С – в течение 5 суток;
- при температуре минус 20 °С – в течение года;
- при температуре минус 70 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала, поэтому образцы плазмы или сыворотки для длительно хранения желательно разлить небольшими аликвотами (0,1 – 0,2 мл) в пробирки объемом 1,5 – 2,0 мл.
Спинномозговая жидкость:
- при температуре 2-8 °С – в течение суток;
- при температуре минус 20 °С – в течение недели;
- при температуре минус 70 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Секционный материал:
- при температуре 2-8 °С – в течение 3 суток;
- при температуре минус 20 °С – в течение недели;
- при температуре минус 70 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Упаковка и транспортировка материала для углубленного изучения, а также хранение в строгом соответствии с требованиями санитарных правил и норм СанПин 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней»(глава IV). Соблюдая условия тройной упаковки и герметичности контейнер с материалом помещают в сумку-холодильник или пенопластовый термоконтейнер с хладагентами (обратить внимание на маркировку последних!!!). Транспортировка (доставка) осуществляется спецсвязью (курьерской службой) или нарочным в условиях «холодовой цепи»: при температуре 0-4 °С – не более 3-х суток; при температуре минус 70 °С или жидком азоте – длительно.
Форма направления на исследование иксодовых клещей
Направление секционного материала для исследования на наличие вируса клещевого энцефалита.
Запрос в субъекты эндемичные по КВЭ
